一种胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌及其构建方法与应用

本发明公开了一种胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过信号肽筛选，将信号肽与贻贝蛋白的基因进行连接并转入质粒pET‑Duet进行融合表达。进一步的，本发明将角质酶Tfu‑0883基因转入质粒pET‑Duet，与信号肽‑贻贝蛋白融合蛋白进行共表达，最终实现贻贝蛋白的胞外分泌。此外本发明通过添加表面活性剂的方式优化了发酵培养基，从而提高胞外分泌水平。纯化后的发酵液中的贻贝蛋白产量可达20‑40mg/L。本发明实现了在大肠杆菌中胞外分泌具有生物活性的可溶性贻贝蛋白，减弱了产物积累造成的细胞毒性作用，促进了贻贝蛋白的持续合成，并且避免了后续破碎细胞操作，优化了工艺。