本发明公开了一种双表达gC基因的伪狂犬病毒gE/gI缺失突变株rPRV‑AH‑gI‑/gE‑/gC+，是在伪狂犬重组病毒rPRV‑AH‑gI‑/gE‑缺失gE/gI基因位置处，通过插入gC基因构建得到的；所述gI/gE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述gC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明所构建的伪狂犬重组病毒rPRV‑AH‑gI‑/gE‑/gC+与其他PRV基因缺失突变株相比，在缺失gI/gE的基础上，创新性插入gC基因，gC作为PRV主要免疫原性蛋白之一，可诱导机体产生中和抗体及细胞免疫应答。本发明进一步提供rPRV‑AH‑gI‑/gE‑/gC+的灭活疫苗，具有较好的安全性且相比现有PRV突变毒株良好更好的免疫原性，中和抗体水平更高，免疫保护效果更好，并可用现有的PRV gE鉴别诊断方法区分野毒感染动物与疫苗免疫动物，有望作为基因工程灭活疫苗应用于对猪伪狂犬病毒新型流行株的防治。